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  1. Métodos para sequenciamento de DNA 1ª Geração: Método enzimático - Frederik Sanger (1980) 2ª Geração: Método de pirosequenciamento - Mostafa Ronaghi (1996)

  2. Sequenciamento de DNA permite determinar a ordem das bases nitrogenadas adenina (A), guanina (G), citosina (C) e timina (T) da molécula de DNA. O RNA, geralmente, não é sequenciado diretamente. Tem que ser convertido em. cDNA (DNA complementar) pela transcrição reversa com a transcritase reversa.

  3. Técnica de sequenciamento de DNA. - Frederick Sanger e colaboradores (1974) proofreading. Temperaturas: Desnaturação 94 – 96oC – 2 min. Pareamento 50oC - 15s. Extensão 60oC - 2min. Sequenciamento Automático do DNA.

  4. O sequenciamento do DNA é de estrema importância pois está empregada na identificação, diagnóstico e tratamento de doenças e principalmente na produção biotecnológica para se desenvolver novos produtos e serviços.

  5. 1 de out. de 2022 · O sequenciamento do ácido desoxirribonucleico (DNA) é resultado de uma série de procedimentos bioquímicos que têm como principal finalidade a determinação da sequência de bases...

  6. • Monitoramento em tempo real da síntese de DNA: – Síntese com primers pela DNA polimerase; – A incorporação é monitorada pela detecção luminosa da liberação do PPi, em uma reação envolvendo a enzima Luciferase; – Complexo com 4 Enzimas incluídas: • Fragmento Klenow da DNA Polimerase I; Pirosequenciamento • ATP Sulfurilase;

  7. Métodos de Sequenciamento do DNA. Maxam e Gilbert (1976) Ø Degradação química seletiva e sequencial de nucleotídeos – em desuso. Sanger (1977) Ø. método enzimático, com terminação controlada da síntese de DNA com di-desoxinucleotídeos. Ø manual ou automatizado.