Resultado da Busca
A síntese de proteínas tem início quando todos os componentes mencionados acima, ou seja, um RNAm, um dos RNAt e as subunidades de um ribossomo se reúnem para formar um ribossomo funcional. Cada ribossomo
síntese protéica são catalisados pelos ribossomos. • à subunidade menor se liga o RNAm e RNAt, enquanto que a subunidade maior catalisa a formação da ligação peptídica.
- Objetivos
- Porque produzir proteínas recombinantes?
- Francis Crick – palestra Nobel 1962
- Sistemas de expressão
- Introdução de DNA heterólogo
- Promotor induzível: operon lac
- Protocolo típico
- O sistema de E. coli
- Sistemas de Levedura
- Sistema Livre de células
- Plantas transgênicas
- Células mamíferos
- Hormônio de crescimento humano
- Insulina
- Hormônio de crescimento humano (hGH)
- C. glutamicum
- Qual sistema de expressão?
Sistemas disponíveis para expressão. Escherichia coli – o sistema mais simples e usado. Sistemas alternativos Leveduras – Saccharomyces e Pichia spp. Baculovírus e células de inseto. Sistema livre de células. Vantagens e desvantagens dos sistemas. que significa síntese protéica? Replicação
Produção de antígenos para usar no desenvolvimento de testes diagnósticos. Leptospirose Produzir vacinas tipo subunidade. Genômica estrutural. Produção de anticorpos e biomarcadores. que significa síntese protéica? Síntese protéica é um fenômeno relativamente rápido e muito complexo, que ocorre no interior das bactérias e das células. Este processo...
“The genetic code describes the way in which a sequence of twenty or more things is determined by a sequence of four things of a different type.” fita de leitura (ORF) código genético é de uma forma universal, qualquer organismo usa o mesmo código Fundamental para biotecnologia; Cada mRNA tem 3 ORFs; Só uma delas codifica a proteína desejada: códig...
Escherichia coli Corynebacterium glutamicum Saccharomyces cerevisiae Pichia pastoris e P. methanolica Baculovírus e células de inseto Células mamíferos Células de plantas Livre de células
Vírus Baculovírus, retrovírus adenovírus Plasmídeos Cromossomos artificiais Bacteriófagos Lambda que tem um vetor de expressão? Origem de replicação E. coli Shuttle vector Marcador de seleção Ex. ampicilina, kanamicina Local de clonagem TOPO Enzimas de restrição
Regulado pelo repressor codificado pelo lacI gene • Repressor se-liga no local do operador O Vetores de expressão
PCR e clonagem de polipeptídeo Validação do plasmídeo Expressão (pequena escala) e triagem para solubilidade Produção em escala larga e purificação de proteínas com cauda
Segundo passo: PCR para amplificar os produtos a serem clonados Clonagem dos produtos de PCR no vetor de expressão Transformar as células competentes de E. coli
Saccharomyces spp. e Pichia spp. vantagens: Proteínas recombinantes com alto rendimento (g/L). Glicosilação. A ponte dissulfeto. Proteínas recombinantes com estrutura mais parecida com a proteína nativa. Secreção da proteína recombinante. Indução de expressão com metanol (Pichia spp.). Estabilidade genética. Baixo custo de produção.
Produção de proteínas tóxicas. Adição de reagentes que podem ajudar no dobramento de proteína recombinante ex. chaperonas e detergentes.
Golden Rice Foram clonados dois genes para a expressão de vitamina A (β-caroteno) na genoma de arroz e o β-caroteno agora pode acumular no grão de arroz. Este arroz está sendo fornecidos gratuitamente para os pais em desenvolvimento.
Chinese hamster ovary (CHO), HEK e COS linhagens são os mais comuns Plasmídeos usados: pSV e pCMV Plasmídeos são usados para transfecção das células Principalmente para proteínas de origem eucariótico Modificações pós-tradução
A biotecnologia mais recente usa células de mamíferos (CHO) e plantas, ex. tabaco. Efeitos colaterais de uso de hGH:
• Os plasmídeos usam o promotor lac para expressar o DNA clonado como uma proteína fusionada com β-galactosidase.
hGH é usado para o tratamento de esclerose múltipla e nanismo pituitário. A fonte original era de glândulas pituitárias humanas removidas durante necropsias. O hGH foi clonado e expressado em E. coli. Produção industrial de amino ácidos
Produção comercial de amino ácidos Glutamato e lisina Componentes de comida humana, animal e produtos farmacêuticas Proteínas secretadas Vias Sec ou Tat Sem lipoproteínas Genome breeding Mutações introduzidas numa maneira controlada
Não existe um sistema de expressão otimizado para todas as proteínas. Cada sistema tem suas vantagens. Fatores para considerar: Rendimento Controle de expressão Solubilidade Modificações pós-tradução Dobramento (estrutura 3D) Secreção da proteína recombinante
sintetase. Sintetases reconhecem RNAt específicos através de interações com anticódon, haste aceptora 3’ e superfície do RNAt. aa é ativado pela reação com ATP formando aa-AMP. Aa é transferido do AMP para a hidroxila 3’ da adenina do RNAt. Ribossomos e a decodificação da mensagem do RNA. Composição do ribossomo.
A síntese proteica é o mecanismo de produção de proteínas determinado pelo DNA, que acontece em duas fases chamadas transcrição e tradução. O processo acontece no citoplasma das células e envolve ainda RNA, ribossomos, enzimas específicas e aminoácidos que auxiliarão...
- Professora de Química
- 4 min
Síntese proteica é o processo pelo qual são produzidas as proteínas. Esse processo ocorre nos ribossomos tanto de células procarióticas quanto eucarióticas. A síntese de proteínas é essencial para que ocorra a manutenção.
Saber como um aminoácido liga-se a um tRNA e como são evitados erros durante esse processo.. Reconhecer a importância das interações códon-anticódon na decifração do código genético e compreender o papel da oscilação nesse processo. Descrever de modo geral o processo de síntese de proteínas.
